過(guò)氧化氫酶（Catalase, CAT, EC 1.11.1.6）是一種常見的抗氧化酶，可催化過(guò)氧化氫（H2O2）分解為水和氧，普遍存在于含有細(xì)胞色素系統(tǒng)的好氧細(xì)胞中。過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞是高度有害的，其積累將導(dǎo)致細(xì)胞靶標(biāo)（例如DNA，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)）的氧化，從而導(dǎo)致誘變和細(xì)胞死亡。通過(guò)使用過(guò)氧化氫酶從細(xì)胞中去除過(guò)氧化氫（H2O2），可以防止細(xì)胞的氧化損傷。過(guò)氧化氫酶在氧化應(yīng)激相關(guān)疾病中的作用已被廣泛研究。過(guò)氧化氫酶還表現(xiàn)出過(guò)氧化物酶活性，其中低分子量醇可用作電子供體。脂肪醇是過(guò)氧化氫酶的特異性底物，然而，具有過(guò)氧化活性的其它酶不利用這些底物。本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品中過(guò)氧化氫酶活性。原理是利用過(guò)氧化氫酶的過(guò)氧化物酶功能來(lái)測(cè)定過(guò)氧化氫酶的活性。在合適濃度的H2O2存在的條件下，過(guò)氧化氫酶與甲醇反應(yīng)，產(chǎn)生甲醛，生成的甲醛可以與顯色物反應(yīng)，產(chǎn)物可以在540nm處測(cè)量吸光度，樣本中的過(guò)氧化氫酶活性與OD值成正比。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)（能測(cè)540 nm處的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
離心機(jī)
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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通常可以按比例縮小，如說(shuō)明書中是約0.1g組織加1ml提取液，可以等比例縮小，如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續(xù)操作不變。此外，對(duì)于數(shù)量少、酶活性低的樣品，一方面可以減少提取液體積，另一方面還可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。
1. 樣品盡可能液氮速凍后保存在-80℃冰箱中，以減少酶活性變化。粗酶液提取全程應(yīng)該保持低溫，包括樣品稱量應(yīng)該迅速完成，粗酶液提取應(yīng)該在冰浴中進(jìn)行，離心應(yīng)該在4℃左右進(jìn)行，測(cè)定過(guò)程中粗酶液應(yīng)該保存在冰浴中。此外，粗酶液提取后應(yīng)該盡快完成測(cè)定，通常不可以留到第二天測(cè)定。
2. 在對(duì)樣本進(jìn)行提取時(shí)，加完提取液好不要用液氮研磨，而且樣本不要反復(fù)凍融，這樣會(huì)破壞酶的活性。凍融會(huì)影響蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)，對(duì)酶活性有一定影響，對(duì)于動(dòng)植物組織，可以直接研磨，對(duì)于細(xì)胞或細(xì)菌之類的樣品，可以使用超聲波。
3. 提取要根據(jù)不同樣本特點(diǎn)進(jìn)行，原則是提取充分和保持活性。對(duì)于有細(xì)胞壁的樣品，一定要注意破壁方法；對(duì)于分布于特定細(xì)胞器中的成分，原則上先分離該細(xì)胞器，然后再?gòu)氖占募?xì)胞器中進(jìn)一步提取需要的成分。對(duì)于存在于膜上的成分，要注意如何分離，去垢劑的使用要小心，以避免酶失活。使用超聲波破碎，一定要防止溫度升高導(dǎo)致失活。特殊樣品可以查閱相關(guān)文獻(xiàn)，參考前人提取方法，或者咨詢我們的研發(fā)專家。
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