活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。正常情況下，細胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現(xiàn)氧化應激。本試劑盒提供了一熒光測定法，用于直接定量檢測組織活性氧。其原理是DCFHDA ROS 探針為還原型二氯熒光素 (2',7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH 迅速與ROS反應生成綠色熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF)，具有488/520nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。綠色熒光強度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測DCFHDA產(chǎn)物的熒光就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。
熒光分光光度計、熒光酶標儀或多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平
全黑96孔板、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
純水、PBS
勻漿器或研缽
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可能的原因有：
1.加樣誤差或漏加試劑。
2.樣本中目標物質(zhì)濃度過高、樣本未充分稀釋。
3.反應時間過長或溫度過高。
通常可以按比例縮小，如說明書中是約0.1g組織加1ml提取液，可以等比例縮小，如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續(xù)操作不變。此外，對于數(shù)量少、酶活性低的樣品，一方面可以減少提取液體積，另一方面還可以延長反應時間。
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