
過氧化氫(H2O2)是生物體內常見的活性氧分子,是一種活性氧代謝的副產物,主要由超氧化物歧化酶(SOD)和黃嘌呤氧化酶(XO)等催化產生,由過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)等催化降解。過氧化氫不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面,H2O2可以直接或間接地氧化細胞內核酸, 蛋白質等生物大分子,使細胞膜遭受損害,從而加速細胞的衰老和解體;另一方面,H2O2也是許多氧化應急反應中的關鍵調節因子。H2O2可以激活 NF-κB 等因子,這些H2O2相關的信號途徑和哮喘、炎癥性關節炎、動脈硬化以及神經退行性疾病等許多疾病相關。H2O2也和細胞凋亡、細胞增殖等密切相關。本試劑盒提供了一種簡單易用的方法,用于測量各種生物樣本中H2O2含量。原理是H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物,在415nm有特征吸收。測定415nm處吸光度增加從而測定H2O2濃度。



酶標儀或可見分光光度計(能測 415nm處的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
恒溫箱、離心機、制冰機
濃鹽酸、丙酮、去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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通常可以按比例縮小,如說明書中是約0.1g組織加1ml提取液,可以等比例縮小,如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續操作不變。此外,對于數量少、酶活性低的樣品,一方面可以減少提取液體積,另一方面還可以延長反應時間。
生化試劑盒初一般是采用分光光度法,用分光光度計測量吸光度。微量法是隨著酶標儀和微孔板的普及,改用酶標儀和酶標板測量吸光度。除了儀器不同以外,主要差別是反應體系更小,一般不超過250ul,計算公式的系數會有一定變化。
d:由比色皿光徑,1cm改為96孔板直徑,0.5 cm(也有0.6cm的)
但對于標明只用分光光度法的試劑盒,不建議使用酶標儀進行酶活性測定。非要用酶標儀進行檢測,一定要按照說明書將反應體系縮小至250微升左右,加樣表中各試劑體積一定要按照比例縮小。不過,因為初研發時是按照分光光度法進行設計和調整的,用戶改變測定儀器后,我們不保證能夠取得好的結果。
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