OCT包埋劑是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，目前已廣泛用于免疫組化實(shí)驗(yàn)室中，其用途是在冰凍切片時(shí)支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。又因OCT混合物為水溶性，故在漂片時(shí)可溶于水，所以在以后的染色中不會(huì)增加背景染色。利用OCT混合物預(yù)先浸潤(rùn)組織，然后再進(jìn)行恒冷箱切片，使切片質(zhì)量得到改善。
1、將放在蔗糖溶液中的組織塊取出，放入20g L-1蔗糖與OCT包埋劑1：1體積比例混合液中，室溫浸泡2h。
2、移入OCT包埋劑中室溫浸泡4h，更換新的OCT包埋劑，室溫浸泡6h。
3、將標(biāo)本置于托物臺(tái)，用恒冷箱切片機(jī)切片(一般-22℃)，片厚10μm，貼于預(yù)處理的載玻片上，-20℃冰箱保存。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過(guò)去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過(guò)程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時(shí)在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時(shí)間過(guò)久，建議減少抗體孵育時(shí)間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過(guò)程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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