
本預(yù)制膠為 Bis-Tris 中性緩沖體系,膠板為塑料材質(zhì),具有優(yōu)良的分離效果,電泳后條帶清晰銳利,預(yù)制膠凝膠穩(wěn)定性好,為使用者帶來(lái)更安全,更高效,更便捷的科研使用體驗(yàn)。
本預(yù)制膠提供不同濃度的梯度膠和固定濃度膠,梯度膠有 4-20%,4-12%,固定濃度膠有 8%,10%,12%三種,10孔膠的大上樣量為 50μl,15 孔膠的大上樣量為 30μl。
預(yù)制膠膠板兼容目前市場(chǎng)大多數(shù)電泳槽,包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System);
Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell;北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意東方JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它能容納膠板寬度在 10cm 的電泳槽。



1. 準(zhǔn)備電泳緩沖液:取一包電泳緩沖液粉末(MOPS-SDS電泳緩沖液即用粉末,貨號(hào):PMK0203)溶解在 1L 的去離子水中。
2. 將預(yù)制膠從包裝袋中取出撕掉膠板底部的膠條,緩慢地拔出梳子,將預(yù)制膠固定在電泳槽中。電泳槽內(nèi)槽倒入足夠的電泳緩沖液,內(nèi)槽電泳緩沖液覆蓋上樣孔,外槽的電泳液加到 1/3 液面處即可,高不可漫過(guò)膠板。
3. 上樣:用5XSDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(貨號(hào):PMK0012)處理樣品,移液器吸取樣品后槍頭以垂直方向 輕輕插入到上樣孔中即可上樣。注意槍頭不要戳破凝膠,也不要過(guò)度插入梳孔使膠板變型造成漏液。
4. 電泳條件:推薦電壓160V,當(dāng)溴酚藍(lán)指示帶電泳至凝膠底部,或?qū)嶒?yàn)預(yù)定位置時(shí),即可結(jié)束電泳。
5. 電泳結(jié)束,取出凝膠。使用撬具或其他合適的工具插入到膠板兩側(cè)之間的空隙中,用撬具慢慢地
上下撬動(dòng)膠板,重復(fù)上述操作,撬動(dòng)上、中、下三個(gè)不同的位置直至膠板兩側(cè)完全打開。
6.膠板打開后,凝膠可能粘在膠板的任意一側(cè),取下無(wú)凝膠的一側(cè),將另一側(cè)的膠板傾斜至水中,輕輕撥動(dòng)凝膠,使凝膠自由掉落到裝有去離子水的器皿中晃動(dòng)清洗凝膠,然后取出進(jìn)行染色或轉(zhuǎn)膜保存條件2-8℃保存,自生產(chǎn)之日起 12 個(gè)月有效。

1. 本預(yù)制膠不能置于 0℃以下冷凍,否則凝膠會(huì)凍裂。
2. 電泳緩沖液建議使用次數(shù)不超過(guò) 3 次,如長(zhǎng)時(shí)間不用請(qǐng)冷藏保存。
3. Bio-Rad 電泳槽使用時(shí)將框架內(nèi)綠色硅膠密封條取出,將其平坦的一面朝外并重新裝回凹槽中壓緊。
更新中
1、可選擇孔徑0.22um的PVDF膜或者NC膜,轉(zhuǎn)膜時(shí)間縮短,另外可采用Tricine-SDS-PAGE體系;
2、也可以選擇PSQ 膜,同時(shí)縮短轉(zhuǎn)移時(shí)間。也可以將兩張膜疊在一起,再轉(zhuǎn)移。其他按步驟即可。
答:可能的原因有:
1、細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì),換一種細(xì)胞;
2、抗體不能識(shí)別目標(biāo)蛋白,多看看說(shuō)明,是否有問(wèn)題;
3、可能是沒(méi)有保持低溫操作,樣品保存不當(dāng),樣品放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng);
4、細(xì)胞中的蛋白質(zhì)被酶降解掉了,可加入蛋白酶抑制劑,抑制蛋白酶活性。
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