5X SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(無氣味)是一種經(jīng)過改良的更加安全、更加健康的無氣味的以溴酚藍(lán)為染料，5倍濃縮的蛋白上樣緩沖液樣。本產(chǎn)品使用了無氣味、水溶性更穩(wěn)定、還原能力相近的還原劑[三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽,TCEP]替代了有氣味的 D-二硫蘇糖醇(DTT)或β-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol)，從而可以確保本SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液在正常使用或加熱時(shí)都不會有異味，使蛋白上樣操作更加安全健康。
1. 在室溫或不超過37℃的水浴中溶解5X SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(無氣味)。水浴溶解后立即室溫存放，盡量避免長時(shí)間置于水浴中。
2. 按照每4ul蛋白樣品加入1ul 5X SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(無氣味)的比例，混合蛋白樣品和5X SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(無氣味)。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。
3. 95℃水浴加熱5-10分鐘，以充分變性蛋白。
4. 冷卻到室溫后，經(jīng)10000~14000g離心2-5min，取上清直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內(nèi)即可電泳。
5. 通常電泳至藍(lán)色染料到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳。
1. 本產(chǎn)品用于蛋白變性時(shí)，建議95oC水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過高(如100oC)或時(shí)間過長(如超過15分鐘)，有可能會導(dǎo)致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。
2. 5X SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(無氣味)不含劇毒的巰基乙醇和有刺激性氣味的DTT，但還原效果一致，對于蛋白樣品的處理效果和電泳效果一致。
3. 5X SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(無氣味)必須完全溶解后再使用。建議根據(jù)使用量和頻率分裝凍存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
1. Yaojia Li，iaying Yu,* Zhiguo Gao, Engineering artificial metalloenzymes for targeted biocatalysis inliving organism. (IF 15.1)
2. Zhiguo Gao，Yaojia Li,* and Baiwang Sun, Chemocatalytic Cell Tagging Platform for Recording Cell-Cell Interactions via Engineered Palladium-Based Artificial Metalloenzymes. (IF 16.6)
答：如果能夠排除下面的幾個(gè)問題，那么問題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強(qiáng)，將底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不穩(wěn)定，失活；
3、ECL底物沒覆蓋到相應(yīng)位置；
4、一抗選擇不當(dāng)；
5、二抗失活。
答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時(shí)間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進(jìn)行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。
答：可能的原因有：
1、膠凝的不均勻或聚合不好，建議灌膠前將溶液充分混勻；
2、某些樣品鹽濃度較高，建議除鹽或?qū)悠符}濃度調(diào)成一致；
3、緩沖液陳舊，成分改變,可以重配；
4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走；
5、電泳時(shí)溫度過高，可以降低電流或電壓；
6、樣品中含有不溶性顆粒，建議樣品充分?jǐn)嚢杌靹颉?/p>
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