固定的目的在于保存細胞 和組織的原有形態結構，固定劑能阻止內源性溶酶體酶對自身組織和細胞的自溶、抑制細菌和霉菌的生長。固定液分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等，較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。
4%多聚甲醛主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成，pH為7.4，該固定液適合于絕大多數組織和細胞的固定，是免疫組織化學和培養細胞固定中常用的固定液之一，它能較好的保護組織和細胞的形態結構以及核酸。
1、 一般組織固定時間控制在4～12h，大標本應適當延長固定時間，培養細胞或細胞爬片固定時間控制在10～15min，特殊情況除外。
2、 10×10ml、10×30ml規格的產品，可固定后直接放入試劑瓶，4℃長期保存。
多聚甲醛溶液(4% )有一定刺激性和腐蝕性。一經開啟，儲存過久固定效果易下降。
避免過度延長固定時間，否則引起生物大分子過度交聯。取材厚度不同，固定時間也不同。
固定液的容量應足夠，一般固定液與組織塊的體積比率應大于10:1。
溫度對固定的影響很明顯，提高溫度可以加速固定作用，但溫度不宜過高。
取出新鮮組織后，應及時固定，無法及時固定時，應保存于生理鹽水中及時送檢。
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1、一抗/二抗濃度可能過高；
2、內源性過氧化物酶具有活性；
3、使用與染色組織相同種屬來源的一抗（例如在小鼠組織上使用小鼠一抗）。應用二抗時，由于二抗是靶向組織種屬的，與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結合；
4、切片/細胞已干燥；
5、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色；
6、非特異性組分與抗體結合。
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