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本產(chǎn)品適用于從瓊脂糖凝膠或PCR產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物中回收DNA，可回收100-10kb的DNA片段。采用了高效的膠溶解技術(shù)和高載量的硅基提取柱，具有回收得率和純度高、操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。

本試劑盒提取的DNA可用于下游的酶切、PCR擴(kuò)增、DNA測(cè)序、連接轉(zhuǎn)化、文庫(kù)構(gòu)建等。

一、膠回收

準(zhǔn)備工作：次使用時(shí)，在Wash Buffer中加入4倍體積的無(wú)水乙醇。將水浴鍋打開(kāi)，設(shè)置為55℃。

1、在紫外燈下從瓊脂糖凝膠中切下目標(biāo)條帶，盡量精確切割目標(biāo)條帶，去除不含DNA的多余瓊脂糖凝膠。(盡可能縮短紫外線長(zhǎng)照射，避免DNA因紫外照射發(fā)生交聯(lián)引起突變)

2、稱(chēng)量切下的膠條后置于干凈的2ml離心管中(可通過(guò)稱(chēng)量加入膠條前后離心管的重量來(lái)計(jì)算膠條重量)，加入3倍膠條體積的Buffer GM。(100mg膠條相當(dāng)于100μl體積。如膠條過(guò)大，可分多管溶解，每管中膠條重量不超過(guò)400mg)  

注：當(dāng)瓊脂糖凝膠濃度>2%時(shí)，加入6倍體積的Buffer GM。

3、將離心管在55℃水浴中孵育5-10分鐘，期間渦旋樣品幾次，直至凝膠完全溶解。

4、加入1倍膠條體積的異丙醇。

5、將提取柱置于收集管上，將樣品加入到提取柱中(單次添加的樣品體積不超過(guò)800μl)，靜置2min， 12000rpm離心1min，之后棄去收集管中的液體。(如樣品體積過(guò)多，可分多次過(guò)柱)。

6、在提取柱中加入600μl Wash Buffer（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm離心30-60s，棄去收集管中的液體。

7、重復(fù)操作步驟6.

8、將提取柱放回收集管中，12000rpm離心2min，盡量除盡清洗液。將提取柱置于室溫放置數(shù)分鐘，晾干以防止殘留的清洗液影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

9、將提取柱置于干凈的1.5ml離心管上，在提取柱中加入60-80μl無(wú)菌水或Buffer EB(盡量滴加在膜中央)，靜置1min后12000rpm離心2min。(使用55℃預(yù)熱的水或Buffer EB能夠提高洗脫效率)

二、PCR產(chǎn)物回收

1、將PCR/酶切產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至干凈離心管中，加入5倍體積的Buffer PB。(如樣品體積≤50μl，則加入250μl Buffer PB)

2、將提取柱置于收集管上，將樣品加入到提取柱中，12000rpm離心1min，棄去收集管中的液體。

3、在提取柱中加入500μl Wash Buffer，靜置2min，12000rpm離心30s，棄去收集管中的液體。

4、在提取柱中加入200μl Wash Buffer，12000rpm離心1min。

5、將提取柱置于干凈的1.5ml離心管中，在提取柱中加入30-50μl無(wú)菌水或Buffer EB(盡量滴加在膜中央)，靜置1min后12000rpm離心1min。(使用55℃預(yù)熱的水或Buffer EB能夠提高洗脫效率)

1、產(chǎn)品可在15-25℃條件下保存15個(gè)月以上。

2、次使用時(shí)請(qǐng)根據(jù)試劑瓶上說(shuō)明在Wash Buffer中加入乙醇。

3、Buffer GM和Buffer PB含有高濃度鹽分，在低溫下或長(zhǎng)期保存會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象。如出現(xiàn)混濁或結(jié)晶，可在37℃孵育5-10min，即可恢復(fù)澄清，不影響使用。

4、本產(chǎn)品的DNA回收率與初始DNA量有關(guān)，初始量越低，回收率越低。

5、對(duì)于<100bp或>10kb的樣品，可適當(dāng)增加吸附時(shí)間和洗脫時(shí)間。

6、Buffer EB可在使用前在55℃水浴預(yù)熱，以增加洗脫效率。

7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

8、本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。