
乳酸脫氫酶(LDH)是一種氧化還原酶(EC1.1.1.27),廣泛存在于各種生物體中。它催化丙酮酸和乳酸相互轉(zhuǎn)化,同時(shí)伴隨著NADH 和NAD+的相互轉(zhuǎn)化。細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液里,其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測(cè)從質(zhì)膜破裂的細(xì)胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性,就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細(xì)胞膜完整性的重要指標(biāo),并被廣泛用于細(xì)胞毒性檢測(cè)。LDH釋放被認(rèn)為是以前使用放射性的51Cr標(biāo)記細(xì)胞,隨后通過51Cr釋放進(jìn)行細(xì)胞膜完整性檢測(cè)的安全有效的替代方法。本試劑盒為研究細(xì)胞毒性提供了一種簡(jiǎn)便的比色測(cè)定法,其原理是基于在典型的細(xì)胞毒性測(cè)定中,將靶細(xì)胞與細(xì)胞毒性化學(xué)試劑或細(xì)胞毒性細(xì)胞(NK 細(xì)胞,細(xì)胞毒性T細(xì)胞)一起培養(yǎng),以誘導(dǎo)靶細(xì)胞死亡和LDH釋放。將含有LDH的上清液轉(zhuǎn)移至新的 96 孔測(cè)定板的孔中,在乳酸脫氫酶的作用下,NAD+被還原生成NADH,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應(yīng)生成NAD+和強(qiáng)生色物甲臜(formazan),在490nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰,從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關(guān)。本試劑盒可以用于細(xì)胞毒性檢測(cè)也可用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測(cè)。



酶標(biāo)儀(能測(cè)490nm處的吸光度)及二氧化碳培養(yǎng)箱
96孔板,透明平底
平板離心機(jī)(可選)
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
更新中...
一旦在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過老,破碎的細(xì)胞殘骸;
(2)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(3)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除;
(4)血清等級(jí)不足以維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng),更換高等級(jí)的胎牛血清。
答:細(xì)胞形態(tài)異??赡苁怯捎谥гw污染、有毒物質(zhì)釋放、營(yíng)養(yǎng)不足等原因引起的。
解決方法有:
1、定期進(jìn)行支原體檢測(cè),確保細(xì)胞無支原體污染;
2、檢查培養(yǎng)基和血清的質(zhì)量,避免使用過期或劣質(zhì)的試劑;
3、觀察細(xì)胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)采取措施,如更換培養(yǎng)基或使用相應(yīng)的藥物處理;
4、對(duì)于有毒物質(zhì)釋放引起的形態(tài)異常,可以嘗試降低細(xì)胞密度或更換培養(yǎng)基。
Copyright ?湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部備案:鄂ICP備17001029號(hào)-1 技術(shù)支持:武漢微盟