日韩大片一卡2卡3卡4卡5卡二-亚洲а∨天堂男人色无码-色偷偷久久一区二区三区-日韩不卡在线中文一区

答：如果能夠排除下面的幾個問題，那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。

1、二抗的HRP 活性太強，將底物消耗光；

2、ECL底物中H2O2不穩定，失活；

3、ECL底物沒覆蓋到相應位置；

4、一抗選擇不當；

5、二抗失活。

答：可能的原因有：

1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；

2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數；

3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調整電極和加樣；

4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜；

5、封閉物使用不當，比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉；

6、封閉時間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜；

7、抗體非特異性結合，可以降低抗體濃度，減少孵育時間；

8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；

9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結合過夜；

10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數和時間；

11、化學顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。

答：可能的原因有：

1、膠凝的不均勻或聚合不好，建議灌膠前將溶液充分混勻；

2、某些樣品鹽濃度較高，建議除鹽或將樣品鹽濃度調成一致；

3、緩沖液陳舊，成分改變,可以重配；

4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走；

5、電泳時溫度過高，可以降低電流或電壓；

6、樣品中含有不溶性顆粒，建議樣品充分攪拌混勻。