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本試劑盒用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取總蛋白，用裂解液勻漿裂解組織或細(xì)胞，作用溫和，提取過程簡便高效，可快速獲得總蛋白。獲得的總蛋白可用于報(bào)告基因檢測、蛋白質(zhì)純化、Western Blot 、免疫共沉淀等后續(xù)研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶的研究，因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。

實(shí)體組織蛋白的提取

1.在1ml的冷裂解液中加入20ul的磷酸酶抑制劑、10ul蛋白酶抑制劑和10ulPMSF混勻，放置在冰上備用；

2. 稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5- 1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；

3. 將組織勻漿液移入1.5ml預(yù)冷的EP管中，4℃12000g離心10min；

4. 吸取上清至新的預(yù)冷的離心管中，即為總蛋白提取物；

5.進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。(提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存) 

培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1.裂解液的用量和配制：10⁷個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml，每1ml的冷裂解液中加入20ul的磷酸酶抑制劑、10ul蛋白酶抑制劑和10ulPMSF混勻，放置在冰上備用；

2. 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，加入10ml/150mm培養(yǎng)板冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液，在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入預(yù)冷的EP管中，顛倒裂解20-30min。

3. 懸浮細(xì)胞：4℃500g~ 800g離心10min收集細(xì)胞，再用10ml/150mm培養(yǎng)板冷的PBS洗兩次細(xì)胞，500g~ 800g離心去上清。同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；

4. 裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4℃12000g離心10min，取上清為總蛋白提取物；

5. 將上清移入新的EP管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。(提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存)