該試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理。酶標(biāo)板預(yù)包被親和純化的抗CRP的抗體。將含有CRP的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入到酶標(biāo)板中，與包被抗體反應(yīng)。再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，并與酶標(biāo)板上捕獲的CRP結(jié)合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-CRP-生物素標(biāo)記抗體-SA-HRP的夾心復(fù)合物。然后，將TMB溶液加入孔中并進(jìn)行孵育，酶促反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后，變成黃色。在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。后通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)OD值來(lái)計(jì)算樣品中CRP的濃度。
酶標(biāo)儀（能測(cè)450nm處的吸光度）
多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)
恒溫箱、低溫離心機(jī)
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
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答：可能的原因有：
1、IHC實(shí)驗(yàn)一抗和二抗不兼容；
2、沒(méi)有足夠的一抗與目的蛋白結(jié)合；
3、抗體可能不適用于IHC，因?yàn)槠淇赡軣o(wú)法識(shí)別蛋白的天然(3D)形式；
4、一抗/二抗/信號(hào)放大試劑盒可能因儲(chǔ)存不當(dāng)、稀釋不當(dāng)或多次反復(fù)凍融而失去活性；
5、該蛋白不存在于目標(biāo)組織中；
6、目的蛋白在組織中含量并不豐富；
7、二抗未避光保存（進(jìn)行熒光檢測(cè)時(shí)）；
8、脫蠟可能不充分；
9、固定步驟可能會(huì)改變抗體識(shí)別的抗原表位；
10、抗體不能穿透蛋白所定位的細(xì)胞核（核蛋白）；
11、PBS緩沖液被細(xì)菌污染，細(xì)菌會(huì)破壞目的蛋白上的磷酸基團(tuán)（磷酸化蛋白）；
12、抗原修復(fù)不全，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來(lái)打開(kāi)抗原表位，以利于與抗體結(jié)合。
1、一抗/二抗?jié)舛瓤赡苓^(guò)高；
2、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶具有活性；
3、使用與染色組織相同種屬來(lái)源的一抗（例如在小鼠組織上使用小鼠一抗）。應(yīng)用二抗時(shí)，由于二抗是靶向組織種屬的，與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結(jié)合；
4、切片/細(xì)胞已干燥；
5、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色；
6、非特異性組分與抗體結(jié)合。
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