
異檸檬酸裂解酶(Isocitrate Lyase ,ICL;EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物種子在萌發過程中,通過乙醛酸循環及其他過程將脂肪轉變成碳水化合物。在乙醛酸循環這一獨特的代謝過程中,異檸檬酸裂解酶是關鍵酶之一。在反應系統中,異檸檬酸裂解酶催化異檸檬酸的分解,形成一分子乙醛酸和一分子琥珀酸。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的ICL活性檢測方法,其原理是:ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD,NADH在340nm下有特征吸收峰,而NAD沒有,在340nm下測定NADH的減小速率可間接反應ICL活性。



酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機,低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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