
本預制膠為 Bis-Tris 中性緩沖體系,膠板為塑料材質(zhì),具有優(yōu)良的分離效果,電泳后條帶清晰銳利,預制膠凝膠穩(wěn)定性好,為使用者帶來更安全,更高效,更便捷的科研使用體驗。
本預制膠提供不同濃度的梯度膠和固定濃度膠,梯度膠有 4-20%,4-12%,固定濃度膠有 8%,10%,12%三種,10孔膠的大上樣量為 50μl,15 孔膠的大上樣量為 30μl。
預制膠膠板兼容目前市場大多數(shù)電泳槽,包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System);
Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell;北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意東方JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它能容納膠板寬度在 10cm 的電泳槽。



1. 準備電泳緩沖液:取一包電泳緩沖液粉末(MOPS-SDS電泳緩沖液即用粉末,貨號:PMK0203)溶解在 1L 的去離子水中。
2. 將預制膠從包裝袋中取出撕掉膠板底部的膠條,緩慢地拔出梳子,將預制膠固定在電泳槽中。電泳槽內(nèi)槽倒入足夠的電泳緩沖液,內(nèi)槽電泳緩沖液覆蓋上樣孔,外槽的電泳液加到 1/3 液面處即可,高不可漫過膠板。
3. 上樣:用5XSDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(貨號:PMK0012)處理樣品,移液器吸取樣品后槍頭以垂直方向 輕輕插入到上樣孔中即可上樣。注意槍頭不要戳破凝膠,也不要過度插入梳孔使膠板變型造成漏液。
4. 電泳條件:推薦電壓160V,當溴酚藍指示帶電泳至凝膠底部,或?qū)嶒烆A定位置時,即可結(jié)束電泳。
5. 電泳結(jié)束,取出凝膠。使用撬具或其他合適的工具插入到膠板兩側(cè)之間的空隙中,用撬具慢慢地
上下撬動膠板,重復上述操作,撬動上、中、下三個不同的位置直至膠板兩側(cè)完全打開。
6. 膠板打開后,凝膠可能粘在膠板的任意一側(cè),取下無凝膠的一側(cè),將另一側(cè)的膠板傾斜至水中,輕輕撥動凝膠,使凝膠自由掉落到裝有去離子水的器皿中晃動清洗凝膠,然后取出進行染色或轉(zhuǎn)膜保存條件2-8℃保存,自生產(chǎn)之日起 12 個月有效。

1. 本預制膠不能置于 0℃以下冷凍,否則凝膠會凍裂。
2. 電泳緩沖液建議使用次數(shù)不超過 3 次,如長時間不用請冷藏保存。
3. Bio-Rad 電泳槽使用時將框架內(nèi)綠色硅膠密封條取出,將其平坦的一面朝外并重新裝回凹槽中壓緊。
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可能的原因有:
1.使用了戊二醇固定——再固定后熒光染色前進行熒光淬滅,染色前檢查自發(fā)熒光;
2.材料本身有自發(fā)熒光——設立陰性對照,通過降低熒光顯微鏡的參數(shù)來消除背景染色;
3.細胞成分中能夠產(chǎn)生自發(fā)熒光的分子(如核黃素、細胞色素等)含量高——盡量選用較亮的熒光抗體,采取熒光本底補償?shù)姆椒ā?/p>
可能的原因有:
1.熒光染料的光譜重疊——選擇光譜分離良好的熒光染料、進行順序染色和成像,減少串色干擾;
2.濾光片設置不當——優(yōu)化濾光片設置,使用窄帶濾光片。
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