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普美克生產的超敏ECL Plus發光底物檢測試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關聯的抗原。其原理是，蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時，顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本產品采用獨特的發光底物系統，降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩定性，使其在4℃避光能穩定放置一年。本產品配制的ECL工作液衰減較慢，15min內熒光幾無減弱，檢測時產生的非特異背景非常低，也可節省抗體和待測樣品的用量，該試劑可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纖維素膜)的Western blot免疫印跡等印跡發光顯色。除用于X光膠片，還可直接使用熒光CCD掃描。

1. 執行常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或者HRP標記核酸探針孵育、洗膜。ECL發光底物是HRP的顯色底物，因此檢測系統終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。

2. 后一次洗膜的同時，新鮮配制發光工作液：分別取等體積的A液和B液1：1混合，混勻后室溫放置備用。取A液和B液一定要用不同的槍頭，另建議工作液現配現用。（100~200μl發光工作液/cm2膜）

3. 用平頭鑷取出膜，膜的下緣輕觸在濾紙上除去多余洗液（勿使膜完全干燥）。將膜完全浸入發光工作液中，與發光工作液充分接觸。室溫孵育1-3分鐘，準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小，但勿降低發光液使用比例。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余液體，留少量工作液，不可讓膜完全干燥。

5.將膜迅速放在兩片潔凈的保鮮膜中間，去除氣泡和皺褶，用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。

6. 暗房內取一張X光膠片至于包裹的膜上壓片，分別曝光不同的時間，如數秒到數分鐘，顯影定影沖洗。曝

光時間需根據曝光強度做相應調整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時壓片。亦可采用熒光成像儀檢

測，將膜放置到熒光成像儀內，按儀器說明書進行檢測。