
TMB顯色終止液(450nm,ELISA)(TMB Chromogen Solution, TMB Substrate Solution or TMB Solution for Immunohistochemistry or Blotting)是一種采用了新單一溶液TMB顯色技術(shù),通過辣根過氧化物酶(HRP)催化TMB顯色,用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過氧化物酶含量。
加入本產(chǎn)品后,TMB顯色反應(yīng)會被終止,并且原來的藍(lán)色溶液會并轉(zhuǎn)變成在450nm處有較強(qiáng)光吸收的黃色溶液,終在450nm測定吸光度并且可以使檢測靈敏度比檢測藍(lán)色吸光度提高1倍左右。由于辣根過氧化物酶與TMB的反應(yīng)在一定時間內(nèi)能持續(xù)進(jìn)行,若不及時終止反應(yīng),可能會由于反應(yīng)達(dá)到平臺期等而影響實驗結(jié)果。TMB顯色終止液根據(jù)吸光度的檢測分為兩種,一種是在450nm進(jìn)行檢測,一種是在620-650nm進(jìn)行檢測。本TMB顯色終止液加入后溶液顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色,并在450nm測定吸光度,本產(chǎn)品終止反應(yīng)后在1小時內(nèi)吸光度保持穩(wěn)定。
本產(chǎn)品相對比較安全。2M硫酸是常用的TMB顯示終止液,但由于其腐蝕性極強(qiáng)而有較大的安全隱患。本產(chǎn)品不含硫酸,使用了相對更加安全的適當(dāng)中強(qiáng)酸,可以有效避免硫酸的強(qiáng)腐蝕性可能對人體造成的傷害。需要注意的是本產(chǎn)品作為中強(qiáng)酸,雖然腐蝕性比硫酸弱很多,但還是有一定的腐蝕性,需要注意適當(dāng)防護(hù)。

1. 對于ELISA等實驗中TMB顯色反應(yīng)的終止:
a. 參考ELISA試劑盒的實驗步驟,在與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次,每次3-5分鐘。
b. 洗滌完畢后,去除洗滌液,加入100μl TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間,直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 加入100μl TMB顯色終止液(450nm, ELISA),隨后在450nm測定吸光度。
2. 對于在96孔板內(nèi)進(jìn)行的其它適當(dāng)檢測 (如檢測組織或細(xì)胞樣品內(nèi)源性的過氧化物酶):
a. 在96孔板內(nèi)每孔加入10-20μl樣品。
b. 加入100μl TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間,直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 加入100μl TMB顯色終止液(450nm, ELISA),隨后在450nm測定吸光度。

1.本產(chǎn)品適用于ELISA等實驗時溶液中TMB顯色反應(yīng)的終止,不適用于膜或組化組化反應(yīng)TMB顯色的終止。
2.加入TMB顯色液或者TMB顯色終止液后,如果有沉淀生成,說明樣品中目的蛋白的含量過高,建議適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測試。
3.本產(chǎn)品有腐蝕性,操作時請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或腐蝕其它物品。
4.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
5.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大??;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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