DiR染料是親脂性的近紅外花菁熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。18個碳的長鏈插入細胞膜中從而對細胞進行染色,?而細胞間的染料轉移可以忽略不計。DiR的發射的是近紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。
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1、沒有對非特異性結合進行封閉或封閉不充分；
2、一抗濃度可能過高；
3、孵育溫度可能過高；
4、二抗可能存在非特異性結合；
5、組織洗滌不充分；仍然存在固定劑；
6、內源性過氧化物酶具有活性；
7、固定步驟導致自發熒光（如果使用熒光檢測）；
8、組織內自發熒光（如果使用熒光檢測）；
9、信號放大過多（間接檢測技術）；
10、底物過多（酶檢測）；
11、色原與組織樣品中存在的PBS反應（酶檢測）。
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