超氧化歧化酶D-蟲熒光素（D-Luciferin）是螢火蟲熒光素酶底物，其量子效率為0.88。反應原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應，接著它被氧化形成二氧雜環丁烷結構并發出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發光用于ATP監控以測定細胞活力以及細菌計數。它還用于報告基因檢測。可與小動物活體成像系統配套使用，用于標記LUC基因后的體內活體熒光檢測。
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1、一抗/二抗濃度可能過高；
2、內源性過氧化物酶具有活性；
3、使用與染色組織相同種屬來源的一抗（例如在小鼠組織上使用小鼠一抗）。應用二抗時，由于二抗是靶向組織種屬的，與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結合；
4、切片/細胞已干燥；
5、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色；
6、非特異性組分與抗體結合。
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