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磷脂酰絲氨酸（PS）是一種帶負電荷的磷脂，正常細胞中，PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜PS由脂膜內側翻向細胞膜外側，使PS暴露在細胞膜外表面。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

將Annexin V進行綠色熒光（FITC）標記，以標記了的Annexin V作為探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此采用Annexin V與PI雙染的方法，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

1.此試劑盒僅供生物實驗研究使用。操作時必須戴口罩/手套/實驗服和其它生化實驗室防護措施。

2.微量試劑需離心數秒將試劑收集至管底后再開蓋取用。

3.Propidium Iodide（PI）有毒，操作時要帶手套，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。

4.AnnexinV-FITC中含有劇毒成分疊氮化鈉（NaN₃）,操作時要帶手套，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。

5.本試劑盒用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不應低于1x10⁶。

6.染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。

7.AnnixinV檢測凋亡細胞的方法適用于懸浮生長的細胞，如：淋巴細胞等細胞的檢測。對于貼壁生長的細胞，由于在胰酶等消化處理過程中會造成細胞膜的損傷，會造成較高的假陽性，而用細胞刮子會造成細胞粘連成團，而影響檢測，可將胰酶消化后的細胞保存在含2%BSA的PBS中，防止進一步的損傷。盡管目前，包括國外也有一些單位采用該方法檢測貼壁生長的細胞。不推薦用該方法檢測，因為其重復性較差，且需要操作時非常小心。

8.消化貼壁細胞殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，終導致染色失敗。

9.細胞固定后可能導致熒光的淬滅，請不要固定樣品。