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磷脂酰絲氨酸（PS）是一種帶負電荷的磷脂，正常細胞中，PS只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜 PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向細胞膜外側(cè)，使PS暴露在細胞膜外表面。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

    將Annexin V進行綠色熒光Fluor 488標記，以標記了的Annexin V作為探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此采用Annexin V與PI雙染的方法，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。

1)       此試劑盒僅供研究使用。

2)       微量試劑需離心數(shù)秒將試劑收集至管底后再開蓋取用。

3)       Propidium Iodide（PI）有毒，操作時要帶手套，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。

4)       本試劑盒用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不應(yīng)低于1x106。

5)       染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。

6)       Annexin V檢測凋亡細胞的方法適用于懸浮生長的細胞，如：淋巴細胞等細胞的檢測。對于貼壁生長的細胞，由于在胰酶等消化處理過程中會造成細胞膜的損傷，會造成較高的假陽性，而用細胞刮子會造成細胞粘連成團，而影響檢測，可將胰酶消化后的細胞保存在含2%BSA的PBS中，防止進一步的損傷。盡管目前，包括國外也有一些單位采用該方法檢測貼壁生長的細胞。我不推薦用該方法檢測。因為其重復(fù)性較差，且需要操作時非常小心。

7)       消化貼壁細胞殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-Fluor 488，終導(dǎo)致染色失敗。

8)       細胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請不要固定樣品。