
Cas13a核酸酶(又名C2c2)是VI型CRISPR-Cas系統效應蛋白,具有RNA介導的RNA內切酶活性。在靶標單鏈RNA存在PFS序列的情況下,可特異性地切割靶標RNA。此外,Cas13a還具有依賴于靶標單鏈RNA的反式切割活性(即旁路切割活性),可用于開發靶標核酸的快速檢測試劑盒。
本公司開發的Cas13a Nuclease源自Leptotrichia wadei(Lwa) 細菌,采用大腸桿菌重組表達,純度超過95%,既可以用于體外RNA切割,體外RNA檢測,也可用于活細胞RNA的調控、RNA基因編輯,同時也可以用于光學探針生物學標記。Cas13a在體外與crRNA穩定結合,將Cas13a/crRNA(或者crRNA質粒)轉入細胞,實現細胞內RNA的編輯,Cas13a/crRNA也可以被靶RNA激活,從而實現體外高靈敏度的RNA檢測。



經多次柱純化,SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶,純度達95%;內毒素含量<100EU/mg;qPCR方法檢測無大腸桿菌基因組殘留;無RNase、核酸內、外切酶污染。
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可能的原因有:
1.RNA沉淀過于干燥——室溫干燥5-10 min即可;
2.溶解緩沖液不合適——使用RNase-free水或TE緩沖液溶解RNA、輕柔吹打或短暫加熱(55℃)幫助溶解。
可能的原因有:
1.裂解液未能有效分離RNA和DNA——在提取過程中加入DNase I處理,降解DNA;
2.未使用DNase處理——使用專門去除DNA污染的RNA提取試劑盒。
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