-
Western Blot（WB）實驗中我做的蛋白質分子量很小(10KD)，怎么做WB?
1、可選擇孔徑0.22um的PVDF膜或者NC膜，轉膜時間縮短，另外可采用Tricine-SDS-PAGE體系；
2、也可以選擇PSQ 膜，同時縮短轉移時間。也可以將兩張膜疊在一起，再轉移。其他按步驟即可。
-
IHC實驗中無染色
答：可能的原因有：
1、IHC實驗一抗和二抗不兼容；
2、沒有足夠的一抗與目的蛋白結合；
3、抗體可能不適用于IHC，因為其可能無法識別蛋白的天然(3D)形式；
4、一抗/二抗/信號放大試劑盒可能因儲存不當、稀釋不當或多次反復凍融而失去活性；
5、該蛋白不存在于目標組織中；
6、目的蛋白在組織中含量并不豐富；
7、二抗未避光保存（進行熒光檢測時）；
8、脫蠟可能不充分；
9、固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位；
10、抗體不能穿透蛋白所定位的細胞核（核蛋白）；
11、PBS緩沖液被細菌污染，細菌會破壞目的蛋白上的磷酸基團（磷酸化蛋白）；
12、抗原修復不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位，以利于與抗體結合。
-
IHC實驗中非特異染色
1、一抗/二抗濃度可能過高；
2、內源性過氧化物酶具有活性；
3、使用與染色組織相同種屬來源的一抗（例如在小鼠組織上使用小鼠一抗）。應用二抗時，由于二抗是靶向組織種屬的，與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結合；
4、切片/細胞已干燥；
5、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色；
6、非特異性組分與抗體結合。
-
IHC實驗中組織形態不清晰或受損
1、抗原修復方法可能過于苛刻；
2、組織可能未充分固定；
3、組織切片從載玻片上脫落（冰凍切片）；
4、組織切片撕裂或折疊，或切片下方可見氣泡；
5、組織形態難以分辨；
6、組織自溶。
-
IHC實驗中高背景
1、沒有對非特異性結合進行封閉或封閉不充分；
2、一抗濃度可能過高；
3、孵育溫度可能過高；
4、二抗可能存在非特異性結合；
5、組織洗滌不充分；仍然存在固定劑；
6、內源性過氧化物酶具有活性；
7、固定步驟導致自發熒光（如果使用熒光檢測）；
8、組織內自發熒光（如果使用熒光檢測）；
9、信號放大過多（間接檢測技術）；
10、底物過多（酶檢測）；
11、色原與組織樣品中存在的PBS反應（酶檢測）。
-
細胞培養中細胞生長緩慢或不生長的可能原因及解決方法
答：可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有：
1. 使用高質量的培養基和血清，確保其無菌、無支原體污染，并保證在保質期內使用；
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定，定期校準；
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數，如溫度、pH值、氣體比例等，以便及時發現問題；
4. 定期更換培養基，保持細胞營養充足；
5. 對于生長緩慢的細胞株，可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。 -
細胞培養中細胞形態異常是由什么引起的，解決方法有那些
答：細胞形態異常可能是由于支原體污染、有毒物質釋放、營養不足等原因引起的。
解決方法有：
1、定期進行支原體檢測，確保細胞無支原體污染；
2、檢查培養基和血清的質量，避免使用過期或劣質的試劑；
3、觀察細胞形態，發現異常及時采取措施，如更換培養基或使用相應的藥物處理；
4、對于有毒物質釋放引起的形態異常，可以嘗試降低細胞密度或更換培養基。 -
細胞培養中細胞凋亡的可能原因及解決方法
答：可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法：
1、優化培養條件，如調整溫度、pH值、氣體比例等；
2、觀察細胞形態和生長情況，及時發現凋亡跡象；
3、對于凋亡嚴重的細胞株，可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選，以找到引起凋亡的原因。 -
elisa實驗標曲線性不好
可能原因 解決措施是
1，標準品稀釋不正確。 確保標準品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準確。 定期校準移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應液蒸發。 用封板膜密封酶標板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數前清潔板底。 -
elisa實驗顯色弱或無
可能原因 解決措施是
1，試劑反應不充分 確保孵育時間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結合物失活 混合酶結合物和底物，通過顯色反應檢查
