靈敏度是試劑盒多次檢測(cè)空白樣本計(jì)算得到的低檢出限，只有樣本濃度高于試劑盒的靈敏度時(shí)檢測(cè)具有意義。

試劑盒檢測(cè)范圍是表示當(dāng)樣本濃度在該范圍內(nèi)，其濃度和檢測(cè)OD值具有良好的線性更新，能夠準(zhǔn)確定量樣本的濃度情況。

不建議將EDTA抗原修復(fù)液回收利用。回收利用的抗原修復(fù)液易污染，很可能滋生細(xì)菌。EDTA通過螯合金屬離子發(fā)揮作用，使用后其有效濃度會(huì)因結(jié)合樣本中的金屬離子而下降，可能無法保證后續(xù)抗原修復(fù)效果。反復(fù)加熱（如高壓或微波處理）可能改變?nèi)芤簆H，影響修復(fù)效率。使用過的液體可能攜帶組織碎片、蛋白質(zhì)等污染物，導(dǎo)致后續(xù)樣本背景升高或假陽性結(jié)果。

生化試劑盒初一般是采用分光光度法，用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度。微量法是隨著酶標(biāo)儀和微孔板的普及，改用酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板測(cè)量吸光度。除了儀器不同以外，主要差別是反應(yīng)體系更小，一般不超過250ul，計(jì)算公式的系數(shù)會(huì)有一定變化。

d：由比色皿光徑，1cm改為96孔板直徑，0.5 cm（也有0.6cm的）

但對(duì)于標(biāo)明只用分光光度法的試劑盒，不建議使用酶標(biāo)儀進(jìn)行酶活性測(cè)定。非要用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，一定要按照說明書將反應(yīng)體系縮小至250微升左右，加樣表中各試劑體積一定要按照比例縮小。不過，因?yàn)槌跹邪l(fā)時(shí)是按照分光光度法進(jìn)行設(shè)計(jì)和調(diào)整的，用戶改變測(cè)定儀器后，我們不保證能夠取得好的結(jié)果。

普通酶標(biāo)板是用來測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)在可見光范圍的生化試劑盒項(xiàng)目的，無法測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)在紫外區(qū)域的項(xiàng)目。可見光是電磁波譜中人眼可以感知的部分，可見光譜沒有精確的范圍;一般人的眼睛可以感知的電磁波的波長(zhǎng)在400~760nm之間，但還有一些人能夠感知到波長(zhǎng)大約在380~780nm之間的電磁波。可見光通常指波長(zhǎng)范圍為:390nm-780nm的電磁波。注意：我們看到的其實(shí)是反射的光，比如ELISA終止后的黃色，黃光波長(zhǎng)為580-595nm，但實(shí)際測(cè)量的450nm是它的補(bǔ)色。

    UV板是紫外板，這些微板有一個(gè)獨(dú)特的紫外線透明底部，是測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)在紫外區(qū)域的理想耗材。紫外光被劃分為A 射線、B 射線和C 射線(簡(jiǎn)稱UVA、UVB 和UVC)，波長(zhǎng)范圍分別為400-315nm，315-280nm，280-190nm

1）對(duì)照的設(shè)置對(duì)于測(cè)定結(jié)果的可靠性影響很大，尤其是待測(cè)液中含有與測(cè)定原理中擬直接檢測(cè)的產(chǎn)物一樣的物質(zhì)時(shí)。通過設(shè)置對(duì)照，不僅可以排除本底的影響，而且可以排除其它一些未知的復(fù)雜影響，保證測(cè)定結(jié)果可靠。

（2）首先考慮的是保證測(cè)定結(jié)果可靠。因此，有些試劑盒只設(shè)空白對(duì)照，但是有些試劑盒每個(gè)樣品都設(shè)對(duì)照。其中后者是根據(jù)反應(yīng)原理，為了排除可能的復(fù)雜影響。

關(guān)于設(shè)置樣本對(duì)照是否造成浪費(fèi)。首先必須要保證測(cè)定結(jié)果可靠，因?yàn)槿绻麥y(cè)定結(jié)果不可靠，就不可能得到正確結(jié)論，那么所有的研究投入，包括前期的樣品培養(yǎng)與處理、購(gòu)買試劑盒的費(fèi)用和用戶的時(shí)間與精力，都會(huì)浪費(fèi)。為此，我們精心權(quán)衡，在必要時(shí)每個(gè)樣品都設(shè)對(duì)照。

動(dòng)物組織及細(xì)胞微生物等，可以用質(zhì)量或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算，也可以建議測(cè)蛋白濃度；植物可建議用質(zhì)量計(jì)算；血液或是其他液態(tài)樣品，可建議用體積計(jì)算。如客戶購(gòu)買蛋白含量測(cè)定試劑盒，除了說明書強(qiáng)調(diào)用考馬斯亮藍(lán)法的，通常建議BCA法。動(dòng)植物組織因?yàn)榈鞍缀扛撸?/span>10mg/ml左右，如果用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度的話通常需要用PBS緩沖液等稀釋液進(jìn)行稀釋。

GSH和GSSG的測(cè)定需新鮮樣品，長(zhǎng)時(shí)間放置的樣品GSH會(huì)被氧化成GSSG，客戶購(gòu)買試劑盒時(shí)，可提供一下建議。GR和TrxR是GSH的再生酶，在不同生物中，可能只有GR或TrxR；GPX和TPX是GSH氧化酶，GCL是谷胱甘肽合成酶。GT是谷胱甘肽降解酶。

AsA和DHA的測(cè)定好是新鮮樣，Gal LDH動(dòng)物中不含有，是AsA合成的關(guān)鍵酶。AAO和APX是AsA的氧化酶，兩者不同之處在于APX需要過氧化氫的參與；MDHAR和DHAR是AsA的再生酶。

1. 樣品盡可能液氮速凍后保存在-80℃冰箱中，以減少酶活性變化。粗酶液提取全程應(yīng)該保持低溫，包括樣品稱量應(yīng)該迅速完成，粗酶液提取應(yīng)該在冰浴中進(jìn)行，離心應(yīng)該在4℃左右進(jìn)行，測(cè)定過程中粗酶液應(yīng)該保存在冰浴中。此外，粗酶液提取后應(yīng)該盡快完成測(cè)定，通常不可以留到第二天測(cè)定。

2. 在對(duì)樣本進(jìn)行提取時(shí)，加完提取液好不要用液氮研磨，而且樣本不要反復(fù)凍融，這樣會(huì)破壞酶的活性。凍融會(huì)影響蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)，對(duì)酶活性有一定影響，對(duì)于動(dòng)植物組織，可以直接研磨，對(duì)于細(xì)胞或細(xì)菌之類的樣品，可以使用超聲波。

3. 提取要根據(jù)不同樣本特點(diǎn)進(jìn)行，原則是提取充分和保持活性。對(duì)于有細(xì)胞壁的樣品，一定要注意破壁方法；對(duì)于分布于特定細(xì)胞器中的成分，原則上先分離該細(xì)胞器，然后再?gòu)氖占募?xì)胞器中進(jìn)一步提取需要的成分。對(duì)于存在于膜上的成分，要注意如何分離，去垢劑的使用要小心，以避免酶失活。使用超聲波破碎，一定要防止溫度升高導(dǎo)致失活。特殊樣品可以查閱相關(guān)文獻(xiàn)，參考前人提取方法，或者咨詢我們的研發(fā)專家。

通常可以按比例縮小，如說明書中是約0.1g組織加1ml提取液，可以等比例縮小，如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續(xù)操作不變。此外，對(duì)于數(shù)量少、酶活性低的樣品，一方面可以減少提取液體積，另一方面還可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。